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PCR反應(yīng)的基本原理與實驗技術(shù)

一、實驗?zāi)康模赫莆誔CR反應(yīng)的基本原理與實驗技術(shù)二、PCR反應(yīng)實驗原理PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，可以選擇性擴增一段DNA序列。其基本步驟是，首先將待擴增的模板DNA變性使之成為單鏈，DNA樣品中，特異性的引物能夠與其互補的序列雜交，在dNTPs和Taq酶存在時，就可以合成模板DNA的互補鏈，反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物加熱使DNA雙鏈變性，溫度下降后，過量的引物又可以開始第二輪的合成反應(yīng)。這種延伸-變性-退火-延伸的循環(huán)可以重復(fù)多次...

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瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法

一、實驗?zāi)康模和ㄟ^本實驗學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法和技術(shù)。二、實驗原理DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負(fù)電荷在電場中向正極移動。由于糖－磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì)，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此他們能以相同的速度向正極方向移動。在一定的電場強度下，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應(yīng)，即DNA分子本身的大小和構(gòu)型。具有不同的相對分子質(zhì)量的DNA片段泳動速度不一樣，可進行分離。DNA分子的遷移速度...

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病毒純化方法

病毒是一類非細(xì)胞型生物，需要寄生在其活細(xì)胞體內(nèi)，雖然大部分病毒對人體是有害的，但是隨著科學(xué)的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)很多病毒有較高的利用價值。例如：可以作為基因工程載體的慢病毒、腺相關(guān)病毒等；還有噬菌體展示技術(shù)，可以幫助我們對蛋白質(zhì)進行相關(guān)研究；以及曾作為細(xì)胞融合應(yīng)用的仙臺病毒；而病毒最重要的應(yīng)用，就是用來制備滅活、減毒、亞單位疫苗。本期，我們主要對病毒疫苗生產(chǎn)過程中的純化方法進行介紹。病毒提純是病毒學(xué)研究的重要前提，病毒的相關(guān)詳細(xì)研究都需要高純度的病毒樣品。病毒純化是在病毒不受損、不失活...

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分光光度計選購指南

光譜儀或分光光度計是用于識別或確認(rèn)樣品中物質(zhì)的化學(xué)種類、化學(xué)結(jié)構(gòu)或濃度的分析儀器。分光光度計將發(fā)射能量源通過溶液并測量不同波長的光強度。若溶液的分子濃度較高，則可能會吸收更多的光。所以，提交用于光譜分析的樣品必須非常純凈，以避免產(chǎn)生不良或受污染的結(jié)果。分光光度計主要由激發(fā)光源、濾光片、比色皿，以及光信號檢測器所組成。選擇合適的分光光度計/光譜儀時要考慮的重要標(biāo)準(zhǔn)：檢測限制您要測量的產(chǎn)品的密度、形狀或尺寸波長范圍分析工作范圍樣品通量（單樣品與多樣品）數(shù)據(jù)質(zhì)量儀器和相關(guān)消耗品的成...

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動物細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器中乳酸含量的控制方法

銨產(chǎn)量過多、乳酸產(chǎn)量過剩、營養(yǎng)限制或與營養(yǎng)補給、添加堿以控制pH值相關(guān)的高滲應(yīng)激等因素，使得動物細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器中的細(xì)胞密度被限制。為了部分克服這些因素，使用乳酸補充和適應(yīng)LSA技術(shù)是減少銨和乳酸產(chǎn)生的一種簡單方法。使用這種簡單的方法，可以實現(xiàn)了將近乳酸產(chǎn)量的大幅度減少，同時在分批搖瓶培養(yǎng)中減少了50%的銨產(chǎn)量。在隨后的補料分批生物反應(yīng)器培養(yǎng)中，使用BiosenC-Line乳酸分析儀測定乳酸產(chǎn)量減少了近8八倍。甚至可以實現(xiàn)3500萬個細(xì)胞/mL的活細(xì)胞密度和2.73億個細(xì)胞...

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