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凝膠電泳的染色方法

凝膠電泳是研究蛋白質(zhì)性質(zhì)的一種相對(duì)簡(jiǎn)單、快速和高靈敏度的工具。它是分析化學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的主要工具。通過(guò)電泳分離蛋白質(zhì)是基于這樣一個(gè)事實(shí)，即帶電分子將在施加電場(chǎng)時(shí)通過(guò)基質(zhì)遷移。蛋白質(zhì)電泳分離的基質(zhì)是聚丙烯酰胺。用于形成聚丙烯酰胺的化學(xué)試劑是單體丙烯酰胺和N，N'-雙丙烯酰胺（雙-丙烯酰胺）。聚合丙烯酰胺和雙丙烯酰的方法是使用TEMED（四*基乙二胺）和過(guò)硫酸銨。聚丙烯酰胺凝膠內(nèi)部的聚合形成了一個(gè)交聯(lián)的微孔網(wǎng)絡(luò)。這種孔隙網(wǎng)絡(luò)允許小蛋白質(zhì)分子快速通過(guò)，同時(shí)減緩較大蛋白質(zhì)的...

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Vero細(xì)胞無(wú)血清懸浮培養(yǎng)技術(shù)驗(yàn)證

大多數(shù)用于抗體生產(chǎn)的細(xì)胞主要基于動(dòng)物細(xì)胞上的開(kāi)發(fā)，如MRC-5人二倍體細(xì)胞、Vero猿猴腎上皮細(xì)胞、Madin-Darby犬腎(MDCK)細(xì)胞和雞胚成纖維細(xì)胞。尤其是來(lái)自非洲綠猴腎臟的Vero細(xì)胞已被廣泛用于vaccine生產(chǎn)，因?yàn)樗鼈儽籛HO機(jī)構(gòu)證明沒(méi)有致癌潛力。許多vaccine，例如針對(duì)基孔肯雅熱、登革熱、日本腦炎、病毒性胃腸炎、脊髓灰質(zhì)炎、狂犬病、羅斯河熱、嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥、天花、西尼羅河腦炎和流感的vaccine都是使用Vero細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)開(kāi)發(fā)的。用于viru...

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一文了解細(xì)菌內(nèi)毒素

內(nèi)毒素(Endotoxin)是一種脂多糖(LPS)，來(lái)源于革蘭氏陰性細(xì)菌外膜，其細(xì)胞壁外膜的外部脂質(zhì)成分由內(nèi)毒素分子組成，細(xì)胞死亡或分解后被釋放出來(lái)。LPS具有三個(gè)結(jié)構(gòu)，由菌體特異性多糖、非特異性核心多糖和脂質(zhì)A三部分構(gòu)成。內(nèi)毒素單體分子量為10kDa左右，在不同成分水溶液中，可形成大分子聚集體，大的可超過(guò)1000kDa。類脂A是內(nèi)毒素多種生物活性或毒性反應(yīng)的主要基團(tuán)。該基團(tuán)沒(méi)有種屬特異性,所以各屬細(xì)菌的類脂A結(jié)構(gòu)相似,其毒性反應(yīng)相似，如發(fā)熱、血液流動(dòng)力學(xué)改變、彌漫性血管內(nèi)凝...

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細(xì)胞支原體污染的原因有哪些

細(xì)胞支原體污染的原因?qū)τ谏飳?shí)驗(yàn)器材細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)說(shuō)，如何預(yù)防細(xì)胞的支原體污染是每一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)者的都會(huì)考慮的問(wèn)題，據(jù)統(tǒng)計(jì)，在細(xì)胞污染原因分析中有超過(guò)60%的細(xì)胞培養(yǎng)物污染都是由支原體所引起的。那么細(xì)胞支原體污染的原因有哪些呢？細(xì)胞支原體污染的原因主要包括：1.不良操作：如操作者未穿實(shí)驗(yàn)服、未戴口罩、未熏蒸操作臺(tái)等，容易引起污染。支原體一般通過(guò)難以追蹤的各種來(lái)源進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)物。其中包括實(shí)驗(yàn)室人員、血清、細(xì)胞培養(yǎng)基、水浴鍋、振蕩培養(yǎng)箱、生物反應(yīng)器、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等。人為污染是上述污染源中...

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細(xì)胞支原體污染怎么處理

用肉眼或光學(xué)顯微鏡檢測(cè)支原體比較困難，所以支原體檢測(cè)一般會(huì)通過(guò)PCR的檢測(cè)、DNA染色、熒光標(biāo)記、瓊脂平板接種等方法來(lái)實(shí)現(xiàn)。在支原體檢測(cè)之前，細(xì)胞應(yīng)連續(xù)培養(yǎng)至少兩周，以便有時(shí)間讓低水平的污染物生長(zhǎng)。對(duì)于測(cè)試，在取樣前至少兩三天內(nèi)不應(yīng)更換培養(yǎng)基。一、培養(yǎng)法在瓊脂平板/肉湯上培養(yǎng)被認(rèn)為是檢測(cè)支原體的“金標(biāo)準(zhǔn)”。在這種方法中，將細(xì)胞培養(yǎng)物的上清液添加到液體或半固體培養(yǎng)基（含有支原體生長(zhǎng)所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)）中。受感染的細(xì)胞培養(yǎng)物會(huì)在液體肉湯和瓊脂平板上生長(zhǎng)。瓊脂平板上很容易看到支原體菌...

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